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蛋白雙向2D-WB電泳實驗服務

蛋白雙向2D-WB電泳實驗服務

產品型號:

所屬分類:蛋白質組學實驗

產品時間:2025-07-09

簡要描述:提供商:上海研謹生物
服務名稱:蛋白雙向2D-WB 電泳實驗服務
規格:實驗服務
價格:500元
收費標準/服務周期/提供結果:
歡迎咨詢詳談,我們會根據您的方案及需求制定詳細的服務協議。
更多實驗技術服務請瀏覽網站其他內容,或來電詳詢!

詳細說明:


蛋白雙向2D-WB電泳實驗服務

實驗技術簡介

2D-WB是雙向電泳與傳統western blot結合而成的一項技術。一般實驗流程 為抗原蛋白混合物先經雙向電泳分離,然后將凝膠蛋白轉印至支持膜上,再通過抗體雜交顯色。2D-WB技術可以檢測到抗原等電點或分子量發生的微小變化,在蛋白翻譯后修飾的研究中有很好的應用;而2D-WB結合質譜鑒定技術,可以從蛋白混合物中找到免疫原性更強的抗原。

2D Westerm blot概述

2D-WB是雙向電泳與傳統western blot結合而成的一項技術。一般實驗流程 為抗原蛋白混合物先經雙向電泳分離,然后將凝膠蛋白轉印至支持膜上,再通過抗體雜交顯色。2D-WB技術可以檢測到抗原等電點或分子量發生的微小變化,在蛋白翻譯后修飾的研究中有很好的應用;而2D-WB結合質譜鑒定技術,可以從蛋白混合物中找到免疫原性更強的抗原。

2D Western blot技術服務內容

1、蛋白質抽提與定量;

2、雙向電泳;

3、轉膜,封閉,孵育,顯示成像。

實驗操作流程

1、第--項電泳(IEF) ,膠條平衡,第二項電泳SDS-APGE.

2、第二項電泳結束后,取出凝膠進行轉膜,轉膜方法可選擇濕法轉移和半干法轉移。常用的膜是NC膜和PVDF膜。

3、封閉,5%脫脂奶粉或5% BSA封閉1小時(室溫)或過夜(4度)。

4、-抗孵育,根據抗體說明書選擇孵育時間,常規的孵育條件是室溫1小時或4度過夜,-抗孵育后取出膜

TBST洗滌3次,每次5分鐘。

5、二抗孵育:根據一抗選擇合適的二抗(抗鼠、抗人、抗兔等),室溫孵育1小時后取出膜TBST洗滌3次,每次5分鐘。

6、顯影:將A、B底物按比例稀釋混臺均勻后滴在膜上,暗室中將膠片置于膜上,蓋上壓片夾,曝光一定時間后將膠片放入顯影液中進行顯影,直到出現清晰的蛋白質條帶,清水漂洗一下后在定影液中定影, 曝光時間需綜臺考慮蛋白質的上樣量,抗體稀釋濃度,抗體孵育時間等因素。

7、定影后,清洗膠片,晾干,標定marker,掃描圖片和2D Western blot圖片分析。

送樣須知,為了保證2D Western blot技術服務能順利進行,樣品寄送需滿足以下要求:

1、顧客提供:組織、細胞、蛋白質溶液等; -抗(可交由研謹公司代購)。

2、運輸要求:干冰或液氮包裝寄送。

注:樣本應避免各類污染和反復凍融。

2D Western blot技術服務報告內容

1、蛋白質定量結果及電泳上樣量;

2、原始膠片、電子圖片及圖片分析結果;

3、2D Western blot完整的實驗報告,包括實驗步驟、使用儀器和試劑等。

附: 2D Western blot實驗步驟

1、2D Western blot蛋白質樣本制備,制備的主要原則是盡可能溶解全部蛋白質,破壞蛋白質與蛋白質間的相互作用,避免各類干擾物質,樣品制備與IEF兼容等。

2、雙向電泳的主要步驟,第-項電(IEF) ,膠條平衡,第二項電泳SDS-APGE.

3、第二項電泳結束后,取出凝膠進行轉膜,轉膜方法可選擇濕法轉移和半干法轉移。常用的膜是NC膜和PVDF膜。

4、封閉, 5%脫脂奶粉或5% BSA封閉1小時(室溫)或過夜(4度)。

5、一抗孵育,根據抗體說明書選擇孵育時間,常規的孵育條件是室溫1小時或4度過夜,一 抗孵育后取出膜TBST洗滌3次,每次5分鐘。

6、二抗孵育:根據-抗選擇合適的二抗(抗鼠、抗人抗兔等), 室溫孵育1小時后取出膜TBST洗滌3次,每次5分鐘。

7、顯影:將A、B底物按比例稀釋混合均勻后滴在膜上,暗室中將膠片置于膜上,蓋上壓片夾,曝光一定時間后將膠片放入顯影液中進行顯影,直到出現清晰的蛋白質條帶,清水漂洗一下后在定影液中定影, 曝

光時間需綜合考慮蛋白質的.上樣量,抗體稀釋濃度,抗體孵育時間等因素。

8、定影后,清洗膠片,晾干,標定marker,掃描圖片和2D Western blot圖片分析。

2011年開始我們致力于在生命科學領域生物醫學實驗外包及論文潤色服務,協助客戶各類實驗服務及論文潤色十余年,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯系。

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