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兔外周血單個(gè)核細(xì)胞分離液試劑盒說(shuō)明書(shū)

【產(chǎn)品規(guī)格】

200ml/Kit

【產(chǎn)品組成】

為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：

【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】

A． 適用儀器

zui大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)

B． 耗材

全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。

首先取抗凝血按體積比 1:1 的比例加入樣本稀釋液（產(chǎn)品編號(hào)：2010C1119）混勻，根

據(jù)稀釋后的樣本量大小，分以下兩種情況：

情況 A：稀釋后的血液樣本量小于 5ml 時(shí)，實(shí)驗(yàn)方法如下：

1. 取一支 15ml 離心管，先加入與稀釋后樣本等量的分離液（注：分離液zui少不得少于 3ml）。

1. 用吸管小心吸取稀釋后的血液樣本加于分離液液面上，400-500g ，離心 20-30min（注： 根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液樣本量越多，離心力越大，離心時(shí)間越長(zhǎng)，具體離 心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到分離效果）。

1. 離心后，此時(shí)離心管中由上至下分為四層。*層為血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色單個(gè) 核細(xì)胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細(xì)胞層。

1. 用吸管小心吸取第二層環(huán)狀乳白色單個(gè)核細(xì)胞層到另一 15ml 離心管中，在離心管中加 入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118），混勻細(xì)胞。

1. 250g，離心 10min。

1. 棄上清。

1. 用吸管以 5ml 清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118）重懸所得細(xì)胞。

1. 250g，離心 10min。

1. 重復(fù) 6、7、8，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實(shí)驗(yàn)所需相應(yīng)液體重懸細(xì)胞。

情況 B：稀釋后的血液樣本量大于等于 5ml 時(shí)，實(shí)驗(yàn)方法如下：

1. 取一支適當(dāng)?shù)碾x心管，先加入與稀釋后樣本等量的分離液。

1. 將經(jīng)稀釋后的血液樣本小心加于分離液之液面上，500-650g（zui大離心力可至 1000g）， 離心 20-30min。（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液量越多，離心力越大，離心 時(shí)間越長(zhǎng)，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到分離效果。加入血液樣本后，樣 本及分離液總體積不得超過(guò)離心管總體積的三分之二）。

1. 剩余步驟同“情況 A”中步驟 3 至步驟 9。

【注意事項(xiàng)】

1. 全過(guò)程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，zui 好在取血 2h 內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，血液存放時(shí)間越長(zhǎng)，細(xì)胞分離效果越差。血液放置超過(guò) 6h 后 分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。

1. 本實(shí)驗(yàn)不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無(wú)靜電、低靜電離 心管及未經(jīng)堿處理過(guò)后的玻璃制品，因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面 會(huì)變成毛面，影響細(xì)胞分離效果。

1. 吸取過(guò)多的單個(gè)核細(xì)胞層及分離液層會(huì)導(dǎo)致分離液交界處的粒細(xì)胞被吸出從而使混雜的

粒細(xì)胞數(shù)量增加。

1. 吸取過(guò)多的單個(gè)核細(xì)胞層上層溶液會(huì)導(dǎo)致血漿蛋白及血小板混雜。

1. 分離液用量大于稀釋后血液樣本時(shí)，分離效果更佳。

1. 如實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過(guò)低，請(qǐng)以尋求幫助，具體詳 見(jiàn)下方生產(chǎn)企業(yè)信息。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

18-25℃保存，有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌，需無(wú)菌條件操作。無(wú)菌條件下操作，啟

封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。

【參考值（參考范圍）】

本實(shí)驗(yàn)單個(gè)核細(xì)胞提取率及純度均大于 80%。

下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例，用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考。

【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】

1. 所獲得單個(gè)核細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。

1. 所獲得單個(gè)核細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。

1. 所獲得單個(gè)核細(xì)胞的鑒定方法 A.流式細(xì)胞技術(shù) B.免疫組化技術(shù)

C.原位雜交技術(shù)

D.PCR 技術(shù)

注：上述技術(shù)方案詳情請(qǐng)登陸本搜索“細(xì)胞分離、

純化、擴(kuò)增、鑒定及生物治療技術(shù)手冊(cè)”，并在說(shuō)明書(shū)項(xiàng)目欄下下載使用。

【可能存在的問(wèn)題及解決方法】

1.    由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問(wèn)題及解決方案如下表所示：

1. 本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地 區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對(duì)離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)，恒定離 心時(shí)間，對(duì)離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。

1. 本分離液依照標(biāo)準(zhǔn)，全部使用藥用級(jí)原料，性能指標(biāo)與國(guó)產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可

能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不*的情況，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。

注：在對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)，直至達(dá)到分離效果，

離心力zui小不得小于 400g，zui大不得大于 1200g。離心時(shí)間以 20-30min 為準(zhǔn)。