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地塞米松快速檢測(cè)詳細(xì)操作說(shuō)明書(shū)
更新時(shí)間:2022-08-26 點(diǎn)擊量:2458

地塞米松

快速檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

一、原理

本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物地塞米松藥物將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗地塞米松藥物抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物地塞米松藥物的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物地塞米松藥物的含量。

二、試劑盒特性

試劑盒靈敏度:   0.1ppb

孵育溫度:       25

孵育時(shí)間:       30min15min

樣本檢測(cè)下限

      ·····································  0.1 ppb

     ·····································  0.2 ppb

     ·····································  0.3 ppb

      ·····································  0.2 ppb

      ·····································  0.2 ppb

尿      ·····································  0.2 ppb

交叉反應(yīng)率

地塞米松  ········································· 100%

樣本回收率

    飼料  ························   90% ±25%

    ··································   85% ±25%

尿 、牛 奶、蜂蜜  ···················  95% ±25%

三、試劑盒組成

1

微量測(cè)試孔

每條8孔,一板12

2

標(biāo)準(zhǔn)液×6

1ml/瓶)

0ppb

0.1ppb

0.3ppb

0.9ppb

2.7ppb

8.1ppb

3

酶標(biāo)記物

7ml

紅色帽

4

抗體工作液

7ml

藍(lán)色帽

5

底物A

7ml

白色帽

6

底物B

7ml

黑色帽

7

終止液

7ml

黃色帽

8

5X濃縮復(fù)溶液

50ml

透明帽

9

20X濃縮洗滌液

40ml

白色帽

四、所用儀器、試劑

具備的儀器:酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)、氮吹儀、恒溫箱、打印機(jī)

微量移液器:?jiǎn)蔚?/span> 20200µl、單道1001000µl、多道 30300 µl

      劑:乙酸乙酯、乙腈、正己烷

五、樣本前處理步驟

樣本處理前須知

a)實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時(shí)要更換吸頭。

b)實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈,必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

樣本前處理需配制:

配液1   乙腈-乙酸乙酯混合液

將乙與乙酸乙酯按1:1混合

配液2   樣本復(fù)溶液:

5X濃縮復(fù)溶液用去離子水14稀釋。

樣本處理:

a)組織處理

1、 2.0±0.05g 均質(zhì)的組織樣本于50ml離心管中;加入2ml樣本復(fù)溶液,再加入6ml乙酸乙酯,振蕩3min4000r/min以上,15離心10min

2、 3ml清澈有機(jī)相至干燥容器中,50-60氮?dú)饣蚩諝獯蹈桑?/span>

3、 1ml正己烷溶解干燥的殘留物,加入樣本復(fù)溶液1ml混合30s4000r/min以上15離心10min;去除上層正己烷;

4、 取下層50µl液體用于分析。

樣本稀釋倍數(shù):  1 

b飼料處理方法

1、 1.0±0.05g 粉碎后的飼料樣本于50ml離心管中;加入6ml乙酸乙酯,振蕩3min4000r/min以上,15離心10min

2、 3ml清澈有機(jī)相至干燥容器中,50-60氮?dú)饣蚩諝獯蹈桑?/span>

3、 1ml正己烷溶解干燥的殘留物,加入樣本復(fù)溶液1ml混合30s4000r/min以上15離心10min;去除上層正己烷;

4、 取下層50µl液體用于分析。

樣本稀釋倍數(shù):  2

c奶粉處理方法

1、 1.0±0.05g 奶粉樣本于50ml離心管中,加入2ml樣本復(fù)溶液,再加入6ml乙腈-乙酸乙酯混合液,振蕩3min4000r/min以上,15離心10min

2、 2ml清澈有機(jī)相至干燥容器中,50-60氮?dú)饣蚩諝獯蹈桑?/span>

3、 2ml正己烷溶解干燥的殘留物,加入樣本復(fù)溶液1ml混合30s4000r/min以上15離心10min;去除上層正己烷;

4、 取下層50µl液體用于分析。

樣本稀釋倍數(shù):  3

(d)蜂蜜處理方法

1、 1.0±0.05g 蜂蜜樣本于50ml離心管中,加入2ml樣本復(fù)溶液,再加入6ml乙酸乙酯,振蕩3min4000r/min以上,15離心10min

2、 3ml清澈有機(jī)相至干燥容器中,50-60氮?dú)饣蚩諝獯蹈桑?/span>

3、 1ml正己烷溶解干燥的殘留物,加入樣本復(fù)溶液1ml混合30s4000r/min以上15離心10min;去除上層正己烷;

4、 取下層50µl液體用于分析。

樣本稀釋倍數(shù): 2

e)尿處理方法

1、 1.0ml 尿樣樣本5ml離心管中,加入2ml乙酸乙酯,振蕩1min4000r/min以上,15離心10min

2、 1ml清澈有機(jī)相至干燥容器中,50-60氮?dú)饣蚩諝獯蹈桑?/span>

3、 1ml正己烷溶解干燥的殘留物,加入樣本復(fù)溶液1ml混合30s4000r/min以上15離心10min;去除上層正己烷;

4、 取下層50µl液體用于分析。

樣本稀釋倍數(shù): 2

f)牛奶處理方法

1、 1.0ml 牛奶樣本5ml離心管中,加入2ml-乙酸乙酯混合液,振蕩1min4000r/min以上,15離心10min

2、 1ml清澈有機(jī)相至干燥容器中,50-60氮?dú)饣蚩諝獯蹈桑?/span>

3、 1ml正己烷溶解干燥的殘留物,加入樣本復(fù)溶液1ml混合30s4000r/min以上15離心10min;去除上層正己烷;

4、 取下層50µl液體用于分析。

樣本稀釋倍數(shù): 2

六、 酶標(biāo)免疫分析程序:

測(cè)定前應(yīng)須知:

1、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(2025)。

2、 使用之后立即將所有試劑放回28

3、 ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測(cè)定程序中的要點(diǎn)。

4、 所有恒溫孵育過(guò)程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。

操作步驟:

1、 28冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(2025)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2、 取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放入自封袋,保存于28

3、 配液:將15ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水按照119稀釋?zhuān)?/span>1份濃縮洗滌液+19份去離子水),或按所需用量配制洗滌液

4、 編號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

5、 標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50µl/到各自的微孔中,然后加酶標(biāo)記物50µl/,再加入50µl/孔的抗體工作液,用蓋板膜蓋板,輕輕振蕩混勻,25環(huán)境反應(yīng)30min

6、 將孔內(nèi)液體甩干,用已稀釋的洗滌液250µl/孔洗板45次,每次間隔1530秒,用吸水紙拍干(拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)

7、 顯色:加入底物A50µl/孔,再加入底物B50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25環(huán)境中避光顯色15min

8、 測(cè)定:加入終止液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處(建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè),5min內(nèi)讀數(shù)),測(cè)定每孔OD值。

七、結(jié)果判定

結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含地塞米松量成負(fù)相關(guān)。

1、粗略判定:

用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:0ppb2.243 0.1ppb1.8160.3ppb1.4150.9ppb0.742.7ppb0.3138.1ppb0.155。則樣本1的濃度范圍是2.7ppb8.1ppb;樣本2的濃度范圍是0.3ppb0.9ppb,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中地塞米松實(shí)際濃度。

2、定量分析

1)百分吸光率的計(jì)算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以100%,即

百分吸光%)=

B

×100%

B0

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以地塞米松標(biāo)準(zhǔn)品濃ng/ml)的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中地塞米松實(shí)際濃度。

若利用試劑盒專(zhuān)業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(歡迎來(lái)電索取)

八、 注意事項(xiàng)

1、 室溫低于25或試劑及標(biāo)本未回到室溫(2025)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。

2、 在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

3、 混合要均勻,否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。

4、 反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。

5、 不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度、OD值變化;不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑。

6、 不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。

7、 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。標(biāo)準(zhǔn)品1的吸光度值小于0.5時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。

8、 該試劑盒最佳反應(yīng)溫度為25,溫度過(guò)高或過(guò)低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

九、儲(chǔ)藏條件和保質(zhì)期

1、 儲(chǔ)藏條件:試劑盒于2-8保存,不要冷凍。

2、  質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見(jiàn)包裝盒。

提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正常有效,不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,請(qǐng)放心使用。

 

2011年開(kāi)始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)外包及論文潤(rùn)色服務(wù),協(xié)助客戶各類(lèi)實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤(rùn)色,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無(wú)法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

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