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復雜植物總RNA提取試劑說明書

RNApurePlantPlusReagent

復雜植物總RNA提取試劑



Cat.No.  K0537 

保存：    2-8℃

組分說明

Cat.No.                     K0537        K0537A

復雜植物總RNA 提取試劑    16ml        80ml

產品簡介

     本試劑可從植物組織、特別是富含多酚或淀粉的植物組織（如甘蔗、馬鈴薯塊莖、松針、蘋果、香蕉、山藥等）中，提取總 RNA，操作方便、快捷。每 100ml（加入β-巰基乙醇后的終體積）可處理 100mg 組織 200 次，處理 5g 組織 4次。由本試劑提取的 RNA 純度高，可直接應用于下游實驗，如 cDNA 合成、RT-PCR、Real-timeRT-PCR、NorthernBlot、

DotBlot、體外翻譯等。

注意事項

1.  預防RNase污染，應注意以下幾方面：

    1）使用無RNase的塑料制品和槍頭，避免交叉污染。

    2）玻璃器皿應在使用前于180℃高溫下干烤4小時，塑料器皿可在0.5MNaOH中浸泡10分鐘，用水*沖洗后高壓滅菌。

    3）配制溶液應使用無RNase的水。

    4）操作人員戴一次性口罩和手套，實驗過程中要勤換手套。

2.  提取的樣品避免反復凍融，否則影響RNA提取得率和質量。

3.  復雜植物總RNA提取試劑在使用前請加入β-巰基乙醇，將β-巰基乙醇與復雜植物總RNA提取試劑以1:4的體積混合，加 入β-巰基乙醇后的復雜植物總RNA提取試劑可在4℃保存1個月。

4.  本品中含有苯酚，具有毒性和腐蝕性。如果吸入體內、接觸皮膚、吞食等會導致中毒、灼傷以及其他身體傷害。使用本制品時應穿戴防護物品，如防護服裝、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接觸到眼睛，應立即用大量的水沖洗并前往醫院治療。

5.  保存在 75%乙醇中的 RNA 沉淀，2-8℃可以保存一周，-20℃條件下可以保存 1 年。RNA 半衰期比較短，容易降解，

    建議提取后盡快進行后續實驗，如反轉錄成 cDNA，NorthernBlot 等。

6.  若下游實驗對 DNA 非常敏感，建議用不含 RNase 的 DNaseI（貨號：YJ2090）對 RNA 進行處理。

自備試劑：β-巰基乙醇、5MNaCl、氯仿、異丙醇、75%乙醇、無RNase的水

操作步驟

小量樣本提取步驟：

1.   取不多于100mg的新鮮植物組織在液氮中充分研磨，將研磨后的粉末收集到離心管（自備）中。

2.   加入500 μl 復雜植物總RNA抽提試劑（使用前檢查是否加入β-巰基乙醇，β-巰基乙醇與復雜植物總RNA提取試劑以1:4的體積混合），反復吹打幾次，使樣本充分裂解。室溫放置5分鐘，使蛋白核酸復合物*分離。

3.   4℃ 12,000rpm離心1分鐘，將上清轉移到一個新的RNase-Free離心管（自備）中。

4.   在得到的水相溶液中加入100μl5MNaCl，混勻。

5.   加入300μl 氯仿，上下顛倒充分混勻。

6.   4℃ 12,000rpm離心10分鐘，將上清轉移到一個新的RNase-Free離心管（自備）中。注意：若提取的植物組織中富含多糖多酚，可重復步驟5、6一次。

7.   加入等體積的異丙醇，混勻，室溫放置10分鐘。

8.   4℃ 12,000rpm離心10分鐘，小心吸棄上清，注意不要吸棄RNA沉淀。

9.   加入1ml75%乙醇，4℃ 5,000rpm離心3分鐘，小心吸棄上清，注意不要吸棄沉淀。

     注意：剩余的少量液體可短暫離心，然后用槍頭吸出，注意不要吸棄沉淀。

10.  室溫放置2-3分鐘，晾干。加入30-50μl 無RNase的水，充分溶解RNA，得到的RNA保存在-70℃，防止降解。

     注意：沉淀不要過分干燥，以免難于溶解。

大量樣本提取步驟：

1.   取1g的新鮮植物組織在液氮中充分研磨，將研磨后的粉末收集到離心管（自備）中。

2.   加入5ml 復雜植物總RNA抽提試劑（使用前檢查是否加入β-巰基乙醇，β-巰基乙醇與復雜植物總RNA提取試劑以1:4的體積混合），反復吹打幾次，使樣本充分裂解。室溫放置5分鐘，使蛋白核酸復合物*分離。

3.   4℃ 10,000rpm離心1分鐘，將上清轉移到一個新的RNase-Free離心管（自備）中。

4.   每10ml 上清水相溶液中加入2ml5MNaCl，混勻。

5.   每10ml 上清水相溶液中加入6ml 氯仿，上下顛倒混勻。

6.   4℃ 10,000rpm離心15分鐘，將上清轉移到一個新的RNase-Free離心管（自備）中。

    注意：若提取的植物組織中富含多糖多酚，可重復步驟5、6一次。

7.   加入0.9倍體積的異丙醇，混勻，室溫放置10分鐘。

8.   4℃ 10,000rpm離心15分鐘，小心吸棄上清，注意不要吸棄RNA沉淀。

9.   加入5-10ml75%乙醇，4℃ 5,000rpm離心5分鐘，小心吸棄上清，注意不要吸棄沉淀。

注意：剩余的少量液體可短暫離心，然后用槍頭吸出，注意不要吸棄沉淀。

10.  室溫放置2-3分鐘，晾干。加入200μl 無RNase的水，充分溶解RNA，得到的RNA保存在-70℃，防止降解。

注意：沉淀不要過分干燥，以免難于溶解。

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