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慶大霉素快速檢測試劑盒說明書

更新時間：2020-12-08　點擊量：2248

慶大霉素快速檢測試劑盒說明書

一、原理

本試劑盒采用間接競爭 ELISA 方法，在微孔條上預包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物慶大霉素將和微孔條上預包被的偶聯(lián)抗原競爭抗慶大霉素抗體，加入酶標記物后，用 TMB 底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物慶大霉素的含量成負相關(guān)，與標準曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物慶大霉素的含量。

二、試劑盒特性

試劑盒靈敏度： 0.05ppb

u 孵育溫度： 25℃

u 孵育時間： 30min～15min

樣本檢測下限

組織 ············································		2.5 ppb
肝臟	··············································	3 ppb
牛奶	··············································	3 ppb

交叉反應(yīng)率

慶大霉素	······································	100%
鏈霉素	·······································	<1%
雙氫鏈霉素 ········································		<1%
新霉素	··········································	<1%

樣本回收率

組織 ······································ 90%±20%

肝臟 ······································ 80%±20%

牛奶 ······································· 90%±18%

三、試劑盒組成

1	微量測試孔	每條 8 孔，一板 12 條

	標準液×6 瓶	0ppb	0.05ppb
2		0.15ppb	0.45ppb
	（1ml/瓶）
		1.35ppb	4.05ppb

3	酶標記物	7ml	紅色帽

4	抗體工作液	7ml	藍色帽

5	底物 A 液	7ml	白色帽

6	底物 B 液	7ml	黑色帽

7	終止液	7ml	黃色帽

8	20X 濃縮洗滌液	15ml	白色帽

9	樣本復溶液	50ml	透明帽

10	10x 濃縮提取液	50ml	藍色帽

四、所用儀器、試劑

具備的儀器：酶標儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量 0.01g）、恒溫箱

微量移液器：單道 20～200µl、單道 100～1000µl、多道 30～300 µl

五、樣本前處理步驟

樣本處理前須知

（a）實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。

（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結(jié)果。

樣本前處理需配制：配液 1 樣本提取液：

10X 濃縮提取液用去離子水按 1：9 稀釋。

樣本處理：

（a）組織（雞肉、豬肉、魚肉、蝦）、肝臟（雞肝、豬肝）樣本處理方法

1、取 1±0.05g 去除脂肪的粉碎樣本，加入 5ml 樣本提取液，振蕩 3min；4000r/min，室溫離心

10min；2、取 50µl 上清液，加入 450µl 樣本復溶液混勻，

混合 30s；3、取 50µl 用于分析。

樣本稀釋倍數(shù)：50

（b）牛奶樣本處理方法

1、取 0.5ml 均質(zhì)的牛奶樣本，加入 2ml 樣本提取

液，振蕩 2min；4000r/min，室溫離心 5min；2、取 50µl 上清液，加入 450µl 樣本復溶液混勻，

混合 30s；3、取 50µl 用于分析。

樣本稀釋倍數(shù)：50

六、酶標免疫分析程序:

測定前應(yīng)須知：

1、使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。

2、使用之后立即將所有試劑放回 2～8℃。

3、在 ELISA 分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是 ELISA 測定程序中的要點。

4、所有恒溫孵育過程，避免光線照射，用蓋板膜蓋住微孔板。

操作步驟：

1、從 2～8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑，室溫（20～25℃）平衡 30min 以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2、取出框架及需要數(shù)量的微孔，將不用的微孔放入自封袋，保存于 2-8℃。

3、配液：將 15ml 濃縮洗滌液（20 倍濃縮）用去離子水按照 1：19 稀釋（1 份濃縮洗滌液+19 份

去離子水），或按所需用量配制洗滌液。4、編號：將樣本和標準品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣本和標準品做 2 孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。

5、加標準品/樣品 50µl/孔到各自的微孔中，加入酶標記物 50µl/孔，然后再加入抗體工作液 50µl/ 孔，用蓋板膜封板，25℃環(huán)境中反應(yīng) 30min。

6、將孔內(nèi)液體甩干，用已稀釋的洗滌液 250µl/孔洗板 4～5 次，每次間隔 15～30 秒，用吸水紙拍干（拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。

7、顯色：加入底物 A 液 50µl/孔，再加入底物 B 液 50µl/孔，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯色 15min。

8、測定：加入終止液 50µl/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標儀于 450nm 處（建議用雙波長 450/630n m 檢測，5min 內(nèi)讀數(shù)），測定每孔 OD 值。

七、結(jié)果判定

結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第 1 種方法，定量判定用第 2 種方法。注意樣本吸光度值與其所含慶大霉素量成負相關(guān)。

1、粗略判定：

用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本 1 的吸光度值為 0.3，樣本 2 的吸光度值為 1.0，標準液吸光度值分別是：

0ppb 為 2.243；0.05ppb 為 1.816；0.15ppb 為 1.415； 0.45ppb 為 0.74；1.35ppb 為 0.313；4.05ppb 為 0.155。則樣本 1 的濃度范圍是 1.35ppb～4.05ppb；樣本 2的濃度范圍是 0.15ppb～0.45ppb，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中慶大霉素實際濃度。