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RIPA裂解液（強）說明書

更新時間：2020-09-23　點擊量：5856

RIPA裂解液（強）說明書

RIPA Lysis Buffer

目錄號：K2333

保存條件：4℃保存。

組分說明

Cat. No. K2333

Volume 100 ml

本產(chǎn)品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途產(chǎn)品簡介

　　RIPA裂解液是一種傳統(tǒng)的組織以及細胞快速裂解液，主要用于從動物組織和哺乳

動物細胞中抽取可溶性蛋白，可用于裂解貼壁細胞和懸浮細胞。按照其裂解液的強度

可以分為強、中、弱三類，具體特點和差異請參考附表2，可根據(jù)實驗需求選擇相應(yīng)產(chǎn)

品。RIPA裂解液（強）可以有效提取細胞核、細胞膜和胞漿蛋白，提取的蛋白可應(yīng)用

于蛋白定量、Western Blot、IP等檢測分析。

　　RIPA裂解液（強）的主要成分為50mM Tris（pH 7.4），150mM NaCl，1%Triton

X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS以及sodium orthovanadate，sodium

fluoride，EDTA，leupeptin等多種抑制劑，可有效抑制蛋白降解。

注意事項

1．為防止蛋白降解，所有的操作盡量在冰上進行。

2．使用RIPA裂解液得到的蛋白樣品，可采用BCA法進行蛋白定量，以測定蛋白濃度。

產(chǎn)品可單獨向本公司訂購，如：K0014 BCA蛋白定量試劑盒。本品含有高濃度的

去垢劑，不能用Bradford法進行蛋白定量。

3．建議在使用RIPA裂解液前，向溶液中加入蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，以防止蛋

白降解，或保持蛋白的磷酸化狀態(tài)。產(chǎn)品可單獨向本公司訂購，如：K2200 蛋白酶抑制劑混合物，K2383 磷酸酶抑制劑混合物。

4．若需獲得更高濃度的蛋白，應(yīng)減少哺乳動物蛋白抽提試劑的使用量。

5．對于培養(yǎng)瓶中的貼壁細胞，推薦先使用常規(guī)方法消化細胞，再參考懸浮細胞蛋白提

取步驟操作。

6．對于離心獲得的細胞，若不確定細胞體積，可根據(jù)細胞數(shù)量計算RIPA裂解液的使用

量。如5×10⁶個Hela細胞約需加入500 μl RIPA裂解液，以此類推。

操作步驟

I 細胞樣品

· 貼壁細胞蛋白抽提

1．小心傾去貼壁細胞的培養(yǎng)液。

2．可選步驟：若培養(yǎng)基中含有酚紅或其他可能影響實驗結(jié)果的物質(zhì)，請先使用預冷的

PBS漂洗細胞。

3．加入適量RIPA裂解液（使用前2-3分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑），試劑使用量請參考

附表1，在冰上用槍頭吹打貼壁細胞。

表 1 貼壁細胞RIPA 裂解液使用量推薦表

細胞培養(yǎng)板類型或培養(yǎng)面積 RIPA 裂解液使用量

100 mm* 500-1,000 µl

60 mm 250-500 µl

6 孔培養(yǎng)板 200-400 µl /孔

24 孔培養(yǎng)板 100-200 µl /孔

96 孔培養(yǎng)板 50-100 µl /孔

* 對于100 mm培養(yǎng)板培養(yǎng)的107個細胞 (50 mg)可裂解獲得約3 mg總蛋白（細胞類型不同略有差異）。

4．將裂解液轉(zhuǎn)移至新的離心管中，冰上孵育20分鐘，使細胞充分裂解。

5．14,000×g離心10分鐘。轉(zhuǎn)移上清液至新管中，進行下一步分析。

· 懸浮細胞蛋白提取

1．懸浮細胞2,500×g，離心5分鐘，棄去上清。

2．可選步驟：若培養(yǎng)基中含有酚紅或其他可能影響實驗結(jié)果的物質(zhì)，請使用PBS漂洗

細胞。漂洗后的細胞懸浮液2,500×g離心5分鐘，棄去上清。

3．加入適量RIPA裂解液（使用前2-3分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑），每5×106細胞加入約

200-500 µl RIPA裂解液，吹打均勻。

4．冰上放置20分鐘，使細胞充分裂解。

5．14,000×g離心10分鐘。轉(zhuǎn)移上清液至新管中，進行下一步分析。

II 組織樣品

1．取適當?shù)腞IPA裂解液，在使用前2-3分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑。

2．稱量實驗組織的重量，按照1：10（g/ml）的比例加入RIPA裂解液后將組織剪成細

小碎片，用電動勻漿器勻漿處理。若需要濃縮的蛋白提取物，可適當減少組織蛋白

抽提試劑使用量。

3．冰上孵育20分鐘，使細胞充分裂解。

4．14,000×g 離心10分鐘。轉(zhuǎn)移上清液至新管中，進行下一步分析。

注：RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中可能會出現(xiàn)一小團透明膠狀物，屬正常現(xiàn)象。該透明膠狀物為基因組。

相關(guān)產(chǎn)品信息

目錄號產(chǎn)品名稱

K2333 RIPA裂解液（強）

K2334 RIPA裂解液（中）

K2335 RIPA裂解液（弱）

K2336 RIPA裂解液（強中弱套裝）

K2337 SDS裂解液

K0002/K0889 哺乳動物蛋白抽提試劑/哺乳動物蛋白抽提試劑盒

K0004/K0891 組織蛋白抽提試劑/組織蛋白抽提試劑盒

K0199B Nc-細胞核/漿蛋白抽提試劑盒

K2200 蛋白酶抑制劑混合物

K2383 蛋白磷酸酶抑制劑混合物

K0014 BCA蛋白定量試劑盒

K0022 SDS-PAGE凝膠制備試劑盒

K0023 ProteinShow-G250蛋白快速染色試劑

實驗代做服務(wù)：

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Western Blot	免疫組化IHC染色	熒光定量PCR	動物模型服務(wù)
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石蠟/冰凍切片	透射電鏡服務(wù)	掃描電鏡實驗	蛋白雙向(2-D)
動物實驗	免疫共沉淀	原位雜交（FIsh）	蛋白質(zhì)純化
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番紅O固綠染色	明膠酶譜MMP	酶活性檢測	動物造模/模型實驗服務(wù)

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